PCR仪可标记有荧光素的探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
PCR仪的PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制,要求越短越好,当PCR仪的降温过程超过60s,就应该检查仪器的制冷系统,对风冷制冷的PCR仪要较*地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。
PCR仪清洗:
1.样品池的清洗
先打开盖子,后用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液体,用棉签吸干剩余液体;打开PCR仪,设定保持温度为50℃的PCR程序并使之运行,让残余液体挥发去除。一般5~10min即可。
2.热盖的清洗
对于PCR仪当有荧光污染出现,而且这一污染并非来自样品池时;或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时,需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面,确保样品池的孔镜干净,无污物阻挡光路。
3.
PCR仪外表面的清洗
清洗仪器的外表面可以除去灰尘和油脂,但达不到消毒的效果。选择没有腐蚀性的清洗剂对PCR仪的外表面进行清洗。