1.琼脂糖凝胶电泳后无PCR扩增产物条带
主要表现：Marker及对照条带均正常，但检测样本无条带。
原因分析：1.反应条件不合适：PCR过程中退火温度过高，退火延伸时间不足，反应循环数过少。
2.核酸模板浓度或纯度低：普通PCR的检测敏感度有限，样本核酸含量低或者含有抑制物。
3.反应体系与核酸扩增不匹配：检测体系中的Mg2+浓度，dNTPs量或Buffer与目标核酸扩增所需条件不匹配。
4.引物设计不当或者发生降解：存在引物二聚体或二级结构，引物稀释后未分装储存条件不适宜或者反复冻融次数过多。
解决方案：1.优化反应条件，梯度摸索退火温度，延长退火延伸时间，增加反应循环数（30-45区间为宜）。
2.对核酸模板进行纯化，或使用商业化核酸提取试剂盒进行提取，增加核酸模板的上样量。
3.优化反应体系（预混体系除外），改变检测体系中的Mg2+浓度及dNTPs用量，更换体系中Buffer。
4.重新设计引物，避免引物二聚体和链内二级结构，在一次稀释引物后可分装成多支小管，减少反复冻融次数。
地址：广州市番禺区小谷围街外环东路280号广东药科大学院系一号楼416室
邮箱：sail@lsolg.com
传真：86-020-39921409
