全自动核酸提取仪采用磁棒吸附转移核酸纯化方式,利用深孔反应板和磁棒套,搭配不同种类的磁珠法核酸提取试剂,同时操作1-96个样本,从血液、细胞、组织、病毒等多种样本中自动分离提取纯化DNA/RNA。仪器通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠,从而实现样本/磁珠/核酸的转移,避免了液体处理过程,提高了自动化程度。
全自动核酸提取仪是针对纷繁复杂的样本,每天的核酸提取可以说是费时费力的工作难题。如果短时间内想稳定拿到实验结果,那么快速、稳定的核酸提取方法就显得十分重要。
比较常见的提取方法有沉淀法,离心柱法和磁珠法,提取步骤基本类似分为裂解、洗涤和洗脱。
全自动核酸提取仪需要注意的细节较多,一处出错都会导致结果的失败。常见的问题主要有产物得率低,产物降解或者试剂残留。针对这些问题,下文整理给出了具体的应对方法,帮助大家避坑。
1、提取的核酸得率低:
样品量与试剂的配比要控制在一定范围,避免超过裂解能力;
破碎研磨的步骤处理细节很重要,一定要充分研磨,这是核酸提取的首要条件;
在洗脱的步骤,使用足量的洗脱液洗脱并充分混匀,避免有团块残存;
实验耗材要匹配,如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同,也会影响核酸的得率。
2、提取核酸出现降解:
提取的样品量要符合试剂的配比,尽量控制样品量达到合适比例;
每个步骤都要注意充分的混合均匀,避免团块的残留影响实验结果;
在洗脱时,时间过长或者温度过高,核酸有可能会降解;
样本切记不可反复冻融,提取的样本要注意在合适的温度保存,长期保存尽量-80℃。
3、提取到的核酸纯度不够高,甚至抑制物残留影响下游实验:
样本量和裂解液等试剂的配比要尽量控制到合适的范围;
混合均匀以确保裂解充分和没有团块残留;
晾干的步骤要充分,否则可能会导致醇类等杂质的残留;
磁棒振荡幅度太小或混合时间太短,磁珠上有杂质残留会影响磁珠吸附核酸的能力。