数字放射自显影系统主要用于对标记化合物的分布和动态变化进行追踪。放射自显影也是基因定位的一种重要手段,即所谓的原位杂交技术。RNA与为其编码的DNA顺序(基因)在分子水平上具有碱基配对的互补关系,因而可以互相结合,形成DNA-RNA分子杂交体。
如果把带有放射性标记的RNA与细胞切片相互作用,RNA即可结合到染色体中与其互补的DNA片断上,把这种切片经放射自显影处理,即显示出了该RNA基因存在的具体染色体部位,为遗传学和基因工程提供有价值的资料。
数字放射自显影系统正确操作步骤:
1、使用前先制备放射性同位素标记的化合物,通常是选用发射低能β射线的同位素,如14C、3H等。
2、使标记化合物被生物组织或细胞吸收,参加生物代谢。
3、把含有标记化合物的组织做成切片,置于载片上,再把切片表面上涂一薄层乳胶,在暗盒中放置一定时间,进行放射性“暴光”,然后按处理照像底片过程,经显影、定影,显示出被射线还原的银粒子。
由于切片中放射性化合物在位置上与银粒子沉淀吻合,因而银粒子可指示出放射性化合物存在的部位。有时还可对切片再进行染色处理,以使标记部位显示明确。
放射自显影可制做用于光学显微镜观察的标本,也可制做供电子显微镜观察的标本,其分辨力约为0.1μm。放射自显影标本处理过程,自涂乳胶步骤开始要在严密的暗室中进行,以免受自然光的干扰,增加本底,降低自显影效果。